背景：蠕形螨是一类小型永久性寄生螨，现已知有140种和亚种，分别寄生在人、犬、羊、猫、猪、鼠等11个目哺乳动物的毛囊、皮脂腺、睑板腺、耵聍腺以及动物内脏内。长期以来，蠕形螨的分类主要依据所寄生的宿主和形态特征，单以生物表型为物种分类依据的传统的分类方法存在明显的缺陷，给分类和谱系分析带来了很大困难和不确定性。基因型能直接反映基因的分子结构特征，它不会因环境的改变而变化，可用于蠕形螨的分类和分子系统学研究。然而，人体蠕形螨的分子生物学研究几乎空白，截止目前，有关人体蠕形螨基因水平的文献在PubMed尚未检索到。在中国期刊网除我们近年发表的两篇蠕形螨DNA提取和RAPD标记的文章外，再未检索到其他公开发表的文章。目的：本论文初次尝试对毛囊蠕形螨（Demodex　folliculorum）、皮脂蠕形螨（Demodex　brevis）与犬蠕形螨（Demodex　canis）进行RAPD-SCAR分子复合标记和线粒体COI部分序列分析，以探讨三种蠕形螨的亲缘关系及在蜱螨亚纲中的分子分类学地位。方法：1）通过流行病学调查，用透明胶带法自重度感染者面部分别收集毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨。犬蠕形螨自宠物医院赖皮病犬病灶部位刮取皮屑收集。2）采用液氮反复冻融研磨法破碎细胞；美国OMEGA公司生产的DNA提取试剂盒提取三种蠕形螨的基因组DNA；用蛋白核酸测定仪测定DNA的纯度和浓度。3）以随机引物扩增蠕形螨基因组，进行多态性分析，根据RAPD指纹图计算遗传距离用于DNA聚类分析；寻找三种蠕形螨的特异性条带，进行重组测序；再分别设计特异性引物转化为SCAR标记。4）根据GenBank中检索的西班牙毛囊蠕形螨COI序列设计特异性引物，对三种蠕形螨基因组进行扩增、重组、测序和比对，分析序列差异百分比、碱基组成、变异位点、简约信息位点、转换/颠换数，计算其遗传距离。5）以GenBank下载的蜱螨亚纲的相关28物种作为外群，构建三种蠕形螨COI部分序列分子系统树，分析其亲缘关系和在蜱螨亚纲中的分子分类学地位。结果：1）蛋白核酸测定仪检测结果显示，试剂盒法提取三种蠕形螨样本DNA的OD　260/280比值为1.60~1.72之间，DNA浓度为90.0~149.2μg/ml之间，均满足实验需要。2）RAPD分析结果显示，10条引物扩增六株蠕形螨DNA片段共239个，单条引物扩增的片段数在5-40个之间；六株蠕形螨扩增DNA片段在35-49个之间；遗传距离和聚类分析显示，两株犬蠕形螨、三株皮脂蠕形螨和一株毛囊蠕形螨各自聚为一支，毛囊蠕形螨与犬蠕形螨先聚为一支后再与皮脂蠕形螨相聚。RAPD-SCAR标记转换显示，CZ10号随机引物可以清楚的鉴定三种蠕形螨，479　bp特异性片段为皮脂蠕形螨所特有，261　bp特异性片段为犬蠕形螨所特有。3）中国西安三种蠕形螨COI部分序列均为429　bp；5株中国西安毛囊蠕形螨与2株西班牙毛囊蠕形螨G+C平均含量相差0.4%，COI序列两两比较差异百分比平均值为1.2%，平均遗传距离为0.014，转换/颠换比为3.9（5/1），均为种内水平。犬蠕形螨和皮脂蠕形螨分别与毛囊蠕形螨的种间平均遗传距离为0.169和0.305，种间/种内分别为12.05和21.79倍。三种蠕形螨种间基因序列替换发生明显增多，毛囊蠕形螨与犬蠕形螨种间的转换位点11个，颠换位点8个；毛囊蠕形螨与皮脂蠕形螨的转换位点12个，颠换位点14个；犬蠕形螨与皮脂蠕形螨转换位点有40个，颠换位点50个，均为种间水平。4）在4种系统树中，三种蠕形螨所均聚为一支，毛囊蠕形螨与犬蠕形螨相聚为一支后，再与皮脂蠕形螨相聚。中国西安与西班牙两个地理株的毛囊蠕形螨聚为一支，但两地理株并未各自聚在一起。而分子系统树显示三种蠕形螨与叶螨的聚类、真螨总目内物种的聚类以及寄螨总目物与真螨总目的聚类均与形态学分类有所差异，均有待进一步研究证实。结论：1）RAPD-SCAR可用于三种蠕形螨的多态性分析、分子标记和亲缘关系分析。2）线粒体COI基因序列可对蠕形螨属种间进行有效的物种鉴定，亦可用于探讨蠕形螨科的属、种分类单元的系统发育问题。毛囊蠕形螨不存在亚种分化。3）RAPD聚类树与线粒体COI系统进化树结果一致，毛囊蠕形螨与犬蠕形螨的亲缘关系近于皮脂蠕形螨。