在临床工作中经常会遇到心跳骤停、休克、脑卒中、低血压等均可导致脑缺血再灌注损伤。细胞酸中毒与能量代谢障碍、氧化应激损伤、兴奋性氨基酸毒性、钙超载、细胞凋亡和炎症损伤等机制互为因果，共同构成了脑缺血再灌注损伤的级联反应。在脑缺血再灌注损伤的众多机制中，细胞凋亡是主要机制之一。酸敏感离子通道（ASICs）是一类阳离子通道，可由胞外酸化而激活，在哺乳动物中枢神经系统、外周神经系统以及部分组织器官有广泛表达，在脑缺血损伤病理过程中发挥重要作用，并参与机体感觉传递、学习记忆、恐惧焦虑、炎症、缺血性损伤等多种生理及病理过程，其中ASIC1a对酸的敏感性较高，与脑缺血再灌注损伤关系最为密切，具有广泛的生理功能和重要的病理学意义，因而备受关注[30]。降钙素基因相关肽（CGRP）是一种神经肽，具有很强的扩张血管，逆转血管痉挛，改善脑组织的脑血循环。广泛分布于中枢及外周神经系统，尤其在脑缺血发生时，脑组织中它的含量增高，具有保护神经元细胞的作用。在局脑缺血再灌注中CGRP能够改善大鼠的空间学习以及记忆能力；CGRP可通过ERK通路，促进人肺泡上皮细胞增殖；CGRP能够使ERK信号通路的活化水平升高，从而降低NMDA受体活性，有效抑制Ca离子内流，保护神经元的功能。Weil的研究表明,CGRP　能够启动修复过程，通过G　蛋白偶联受体激活Ras/　Raf/MEK/　Erk　通路来增加Erk　蛋白的表达，促进细胞存活。MAPK通路目前研究最为广泛的就是ERK1/2，存在于细胞浆中，其可被多种因子激活从而发生磷酸化活化，之后转位至细胞核，调节转录因子的活性。本课题组前期研究表明ASIC1a的激活可能抑制ERK1/2通路的激活，从而降低该通路的神经保护作用。CGPR可增加缺血再灌注组织皮质及海马Erk　mRNA的表达，表明CGRP对缺血神经元具有保护作用。本实验采用大鼠全脑缺血再灌注模型，HE染色光镜下组织形态学观察、TUNEL法检测细胞凋亡以及免疫组织化学检测CGRP的表达等方法来探讨在全脑缺血再灌注中ASIC1a通道对CGRP表达的影响。
目的：
1.　探讨ASIC1a对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马神经元凋亡的影响；
2.　探讨全脑缺血再灌注中ASIC1a通道与降钙素基因相关肽(CGRP)　的关系。
方法：
实验一：将健康清洁的54只成年SD雄性大鼠（体重180-220g）采用随机分组法分为3组：①假手术组（SH组，n=18），仅分离暴露出双侧椎动脉及颈总动脉，不凝断椎动脉且不夹闭双侧颈总动脉，予再灌注后30min时侧脑室注射PBS液；②缺血再灌注组（IR组，n=18），采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型，再灌注后30min侧脑室注射PBS液；③ASIC1a抑制剂组（PcTX1组，n=18），采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型，再灌注后30min侧脑室注射rPcTX1。每组根据再灌注时间的不同再分为6h、12h、24h、3个亚组，每亚组6只动物。每组实验大鼠按要求在预定时间点给予4%多聚甲醛心脏灌注处死，完整取出大脑组织，在视交叉后1mm及视交叉后4mm处各切一刀取冠状面组织块，制备海马冠状面石蜡切片，进行HE化学染色并在光镜下观察海马CA1区神经元形态学变化，TUNEL法染色对海马CA1区神经元凋亡进行定量分析。
实验二：取实验一中制备的海马冠状面石蜡切片，采用SABC法进行免疫组织化学染色，检测海马CA1区CRRP的表达情况并进行定量分析。
结果：
实验一：HE化学染色显示，海马CA1区，在SH组锥体细胞排列整齐，紧凑，3-4层边界清晰的细胞，胞浆淡红色，胞核蓝染，高倍镜下，胞核大而圆，核仁清晰，1-2个；IR组锥体细胞结构破坏，排列紊乱松散，细胞间隙增大，边界不清，细胞大小不等、数量减少，胞核皱缩，可见凋亡小体；PcTX1组形态结构变化介于上述两组之间。TUNEL法检测结果显示，在海马CA1区，SH组凋亡锥体细胞极少，IR组凋亡细胞明显高于SH组，12h凋亡细胞数量显著增加；PcTX1组凋亡锥体细胞较IR组明显减少。
实验二：免疫组织化学检测结果显示，海马CA1区，SH组CGRP表达很低，IR组CGRP的表达6h即有升高，12h到高峰，24h与SH组无显著性差异（P＞0.05）；PcTX1组CGRP的表达较IR组更高，6h、12h与IR组比较均有显著性差异（P＜0.01）。
结论：
1.　大鼠全脑缺血再灌注后，海马神经元凋亡明显加重，应用ASIC1a特异性抑制剂PcTX1后可明显减轻神经元凋亡。
2.　大鼠全脑缺血再灌注后，海马神经元CGRP的表达增加，应用ASIC1a特异性抑制剂PcTX1后，CGRP表达上调水平更高。
大鼠全脑缺血再灌注后，ASIC1a的激活促进海马神经元凋亡，在此过程中，CGRP与ASIC1a呈负相关，ASIC1a的激活可能抑制CGRP的表达，从而降低CGRP的神经保护作用。