研究目的和意义：
缺血再灌注损伤（ischemia　reperfusion　injury，IRI）是影响移植物存活时间的关键因素，在尸体器官捐献（donation　after　death，DD）时代，其损害程度和产生的危害愈发显著，亟待解决。核苷酸结合寡聚化结构域蛋白（NOD）样受体（NOD-like　receptors,　NLRs）家族作为胞内模式识别受体，是固有免疫和炎症反应的重要调节分子，对组织细胞的炎性损伤、获得性免疫系统的激活等均有明显作用，在固有免疫反应中越来越受到重视。但NLRs家族在肾脏等移植物IRI中未见系统报道，尚需进一步探索，以求更全面细致的了解其作用及分子机制，探索更具优势的移植物早期损伤干预措施，降低发病率、死亡率，造福器官移植受者。
研究方法：
1.　C57BL/6小鼠（雄）行肾脏IRI造模，于术后24h和48h分别留取肾脏标本，经BGISEQ-500平台全mRNA转录组测序后，分析NLRs、TLRs、CLRs、RLRs等模式识别受体家族各成员在转录水平的表达情况，及与常见通路及疾病等基因相关性分析；western-blot检测主要NLRs家族成员在肾组织细胞中蛋白水平的表达情况。
2.　HK-2细胞通过无糖培养基和乏氧培养箱体外模拟肾脏IRI过程，通过siRNA干扰NLRX1的表达，检测与IRI组和正常培养组相比，在NLRX1表达、细胞存活、凋亡、氧化和硝化应激、炎性因子mRNA表达、线粒体形态上的差异；分别构建C57BL/6野生型、NLRX1-/-小鼠肾脏IRI模型，24h和72h分别留取外周血和肾脏标本，检测并对比小鼠肾功能指标、HE病理改变、组织细胞坏死与凋亡、炎性细胞浸润、炎性因子分泌、氧化和硝化应激反应、缺氧诱导因子1表达、线粒体功能状态等差异。
3.　HK-2细胞通过无糖培养基和缺氧培养箱体外模拟肾脏IRI过程，通过siRNA干扰NLRC5的表达，检测与IRI组和正常培养组相比，在NLRC5表达、细胞存活、凋亡、氧化应激、信号通路PI3K/Akt上的差异，通过PI3K抑制剂wortmannin验证该通路的作用；不同剂量的NOD抑制剂曲克芦丁处理C57BL/6小鼠肾脏IRI模型，检测并对比小鼠肾功能指标、HE病理改变、组织细胞凋亡、炎性因子分泌、NLRC5及其下游IFN-α、IFN-β和NK-κB、PI3K/Akt通路的表达情况、氧化应激反应等差异。
4.　收集40例移植肾零点穿刺标本，对其进行NLRs家族主要成员及结构相近分子AIM2的免疫组化染色，收集并统计40例标本热、冷缺血时间、供体评分及对应受体一般临床资料、术后肾功能恢复情况、有无DGF发生、并发症等指标，分析NLRs家族在移植物中的表达与热、冷缺血时间、肾小管坏死及短期预后的关系；
研究结果：
1.　与假手术组相比，肾脏IRI后NLRs、TLRs、CLRs、RLRs等多种模式识别受体家族的mRNA表达均会出现明显变化，其中NLRs家族中转录水平表达在48h内明显增加的是NLRP10、NLRC4、NLRC5、NLRX1和NLRP3；western-blot检测结果与转录组mRNA测序结果的表达趋势一致。
2.　HK-2细胞通过体外模拟IRI过程后，NLRX1表达明显升高；与对照组相比，siRNA干扰NLRX1蛋白表达后细胞死亡率、凋亡发生率、氧化及硝化应激水平均有明显升高，炎性相关通路和炎性因子表达无明显变化，线粒体异形率上升；相对于野生型C57BL/6小鼠，NLRX1-/-小鼠肾脏IRI后肾功能及肾组织病理损伤程度增加，肾小管上皮细胞凋亡率升高，中性粒细胞、巨噬细胞浸润、炎性相关蛋白NF-κB、促炎性细胞因子表达变化不明显，氧化及硝化应激指标增高，HIF-1蛋白表达降低，线粒体形态学损伤明显，线粒体分裂蛋白1、分裂素1蛋白水平升高，总体表现为NLRX1在缺血和再灌注中对线粒体发挥重要保护作用。
3.　siRNA干扰NLRC5表达后，HK-2细胞对IRI的耐受力升高，体现在存活率升高、凋亡减少，其氧化应激指标减低，细胞增殖关键通路PI3K/Akt的磷酸化水平升高，而抑制PI3K后si-NLRC5对HK-2细胞凋亡和氧化应激的抑制作用降低。曲克芦丁对肾脏IRI表现出明显的保护作用，其能明显降低NLRC5及其下游促炎性因子IFN-α、IFN-β及NK-κB的表达，减轻肾脏组织病理损伤程度，抑制炎性因子表达，降低氧化及硝化应激反应程度，并可增加PI3K/Akt通路的活性，减少肾实质细胞凋亡的发生。
4.　40例移植肾零点穿刺标本中NLRs家族蛋白表达水平在各样本中有明显不同，在常见的NLRs家族成员中，与急性肾损伤程度、受体肾功能恢复时间及术后DGF的发生存在明显统计学关系的是NLRP3和NLRP12。
结论：
1.　肾脏IRI后NLRs家族各成员表达均出现变化，最明显的是其中的NLRP10、NLRC4、NLRC5、NLRX1和NLRP3，其与免疫系统的激活、免疫相关性疾病和组织损伤的发生发展存在明显的相关性。
2.　NLRX1在肾脏IRI中表达水平增加，抑制其表达后组织损伤程度增加，证明其是NLRs家族中具有保护性作用的受体蛋白，这种保护作用与其减轻线粒体损伤、增加HIF-1的表达有关。
3.　降低NLRC5的表达可以在体外IRI中通过活化PI3K/Akt通路保护HK-2细胞，药物曲克芦丁可通过抑制NLRC5-IFN-I介导的炎症反应并增加PI3K/Akt通路活化水平以减轻AKI的程度。
4.　移植肾零点穿刺标本NLRP3和NLRP12免疫组化结果与供体低血压及热缺血时间、心肺复苏、组织病理损伤和受体术后肾功能的恢复情况存在统计学相关性，可以作为移植肾损伤评估的生物标志物。